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Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Imagerie par bioluminescence de la croissance tumorale GL261
- Vaporisez une quantité généreuse de désinfectant (solution de chlorure de diméthylammonium à 0,05 %) sur une serviette en papier propre. Utilisez l’essuie-tout imbibé de désinfectant pour essuyer soigneusement la feuille noire, les cônes nasaux et le séparateur à l’intérieur de la chambre d’imagerie où les animaux seront en contact avec l’appareil. Essuyez soigneusement toutes les surfaces avec un essuie-tout propre et sec. Répétez l’opération une fois de plus et attendez 5 min.
- Initialisez la station d’imagerie.
- Anesthésier la souris avec un mélange de 300 μl contenant 200 μl de kétamine/xylazine et 100 μl de luciférine (sel de potassium de D-luciférine, 150 mg/kg) par injection intrapéritonéale.
- Attendez 10 min après l’injection et confirmez si les souris sont complètement sous anesthésie en pinçant la queue. Pour configurer le système d’imagerie, sélectionnez « Luminescent », Temps d’exposition « Auto » et Binning « Moyen ». Placez les souris sur la station d’imagerie et cliquez sur le bouton « Acquérir » pour démarrer l’image. Assurez-vous que le temps après l’injection est cohérent avec chaque séance d’imagerie.
- Une fois l’image acquise, une fenêtre d’image et une palette d’outils doivent apparaître. Cliquez sur la région d’intérêt (ROI) ou sur « Outils ROI » et sélectionnez « auto » dans l’icône en forme de cercle. Pour définir les ROI, encerclez la zone du signal sur l’image, puis prenez des mesures du ROI en tant qu’unité de photons/sec/sr/cm2.
- Sortez les souris de la chambre d’imagerie et surveillez-les jusqu’à ce qu’elles deviennent ambulatoires et conservent une activité normale. En règle générale, le temps de récupération est d’environ 15 minutes. Ne remettez pas les souris dans la cage avec d’autres animaux avant qu’elles ne se remettent complètement de l’anesthésie.
- Surveiller la croissance tumorale par imagerie par bioluminescence deux fois par semaine jusqu’à ce que les animaux présentent les symptômes suivants : perte de poids (perte de plus de 20 % par rapport au poids avant l’implantation), inappétence (anorexie complète pendant 24 heures) et absence de réponse ciblée soutenue aux stimuli doux (faible tentative de se lever), moment auquel ils doivent être euthanasiés.
- Normalisez les valeurs de luminescence pour chaque jour par rapport aux lectures correspondantes obtenues le premier jour de l’imagerie de bioluminescence (Figure 1A).
- Pour l’analyse statistique, générez des courbes de survie à l’aide de l’estimateur de Kaplan-Meier et comparez les différences entre les courbes de survie à l’aide d’un test de log-rank.
